EIF2AK4的组氨酸tRNA合成酶样结构域（GCN2）结合不带电荷的tRNA，从而激活EIF2AK4的蛋白激酶结构域（Inglis等人，2019年，根据酵母同源物和小鼠同源物推断）。在缺乏tRNA的情况下，EIF2AK4似乎存在于反平行和平行二聚体之间的平衡中。结合tRNA后，平行二聚体稳定，C端结构域从蛋白激酶结构域转移，导致EIF2AK4激酶活性的激活（从酵母同源物GCN2推断）。
EIF2AK4与GCN1和核糖体的P-柄相互作用（Inglis等人，2019年），尽管哺乳动物EIF2AK4和核糖体之间的相互作用不如酵母GCN2和核糖体之间的相互作用稳定（根据酵母同源物和小鼠同源物推断）。通过这种短暂的相互作用，EIF2AK4的群体可以从更多的核糖体样本中获取不带电荷的tRNA。EIF2AK4和GCN1之间的相互作用是EIF2AK4有效磷酸化EIF2S1所必需的，GCN1可将不带电荷的tRNA从核糖体A位点转移到EIF2AK4（从酵母同源物和小鼠同源物推断）。