位于细胞核内的核糖核酸酶P RNA蛋白复合物在前tRNA的5'端附近内切，产生成熟的5'端（Ferrari等人1980年，Bartkiewicz等人1989年，Jiang等人2001年，Reiner等人2011年，Jarrous 2002年评论）。裂解的位置由tRNA受体和T茎中螺旋的长度决定（Yuan和Altman，1995）。人类细胞具有不同的核和线粒体核糖核酸酶P活性（Rossmanith等人，1995年），核核糖核酸酶P定位于核仁（Jarrus等人，1999年）。核核糖核酸酶P在具有催化RNA成分方面与细菌酶相似。线粒体核糖核酸酶P仅包含蛋白质亚单位是不寻常的（Holzmann等人，2008年）。