ROBO3拮抗ROBO1/ROBO2的功能，以防止其对SLIT的反应，从而允许表达ROBO1/ROBO2的细胞向地板移动并穿过地板。目前还不清楚ROBO3是如何干扰ROBO1/ROBO2功能的(Chen et al. 2008)。研究表明，ROBO3亚型ROBO3.1降低了细胞表面ROBO1和ROBO2的数量，表明ROBO3.1通过引导ROBO1和ROBO2进入晚期核内体和溶酶体依赖的降解途径发挥作用(Li et al. 2014)。证明了ROBO3.1与ROBO2的直接结合(Li et al. 2014)。

在果蝇的连合轴突中线交叉过程中，Robo1信号也可被反式表达的Robo2拮抗。Robo1和Robo2的细胞外结构域可能通过它们的Ig结构域相互作用，防止Robo1被狭缝激活并干扰轴突排斥(Evans et al. 2015)。