含4Fe-4S的铁硫团簇由ISCA1:ISCA2异质二聚体上的2Fe-2S团簇组装而成(Banci et al. 2014, Brancaccio et al. 2014，推自Mühlenhoff et al. 2011的Saccharomyces cerevisiae)。GLRX5:2Fe-2S可以在体外将2Fe-2S簇捐赠给ISCA1:ISCA2 (Banci et al. 2014, Brancaccio et al. 2014)。目前尚不清楚是否其他蛋白质也捐献2Fe-2S簇。ISCA1:ISCA2异二聚体的两个保守的c端半胱氨酸从GLRX5中提取[2Fe-2S]簇，形成一个含有两个2Fe-2S簇的ISCA1:ISCA2:GLRX5中间体(Brancaccio et al. 2017)。将两个结合在中间产物上的2Fe-2S团簇转化为4Fe-4S团簇所需的生理电子供体尚未被确定。ISCA1、ISCA2和IBA57是形成全酶(如乌头酸酶)所必需的，这些全酶含有4Fe-4S簇(Sheftel et al. 2012)。酵母JAC1的同源物HSCB (HSC20)与HSPA9相互作用，似乎促进了反应(Uhrigshardt et al. 2010)。