维生素D3活化的第二步需要将25-羟基vitamind3（钙化二硫醇）的羟基化至1Alpha-25-二羟基维生素D3（钙三醇）。该转化率是由25-羟基vitamind-1α羟（Cyp27b1）介导的（Zehnder等，2002，Fritsche等，2003）。CYP27B1中的缺陷可引起佝偻病，维生素D依赖性1A（VDDR1A; MIM：264700），一种由维生素D（CTL）的活性形式缺乏造成的骨矿化和佝偻病的临床特征引起的疾病（KIM 2011）。导致CYP27B1功能完全丧失的突变包括R107H，G125E，R335P，P382S，R389G，R389H和D320TFS * 32（Kitanaka等，1998，Wang等，2002，Wang等人。1998）。
