翻译开始时，线粒体mRNA结合28S亚单位：MTIF3（28S亚单位：IF-3Mt，28S亚单位：IF3mt）复合物和MTIF2:GTP（IF-2Mt:GTP，IF2mt:GTP）（见Christian和Spremulli 2012，Kuzmenko等人2014）。根据牛同源物推断，28S亚基、39S亚基和55S全核糖体与内膜的基质侧面结合，翻译产物在翻译发生时插入内膜（Liu和Spremulli 2000）。线粒体mRNAs没有1-3个核苷酸的未翻译前导或短前导，但两个双顺反子转录本RNA7和RNA14除外，它们具有重叠的ORF，分别编码ND4L/ND4和ATP8/ATP6。。N-甲酰蛋氨酸-tRNA与起始密码子的结合导致mRNA和28S亚单位之间形成稳定的复合物，而mRNA 5'端缺少起始密码子导致mRNA在28S亚单位中滑动并最终分离。然后，39S亚单位结合28S亚单位：mRNA复合物，GTP水解，起始因子MTIF3和MTIF2:GDP解离。