受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）通过磷酸化人MLKL和小鼠MLKL中激酶样结构域内的苏氨酸357（T357）和丝氨酸358（S358）残基激活混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）（Sun L et al.2012:Wang H et al.2014；Murphy JM et al.2013；Tanzer MC et al.2015；Rodriguez DA et al.2016）。RIPK3激活MLKL的确切机制尚不完全清楚，可能因物种而异（Davies KA et al.2020；由Murphy JM 2020审查）。已知MLKL的假激酶结构域（psKD）与激酶结构域结合（KD）RIPK3，在人体系统中稳定存在（Sun L等人2012；Davies KA等人2018；Petrie EJ等人2018、2019a），但在小鼠系统中短暂存在（Tanzer MC等人2015；Rodriguez DA等人2016；Petrie EJ等人2019b）.激酶死亡的RIPK3突变体无法结合MLKL或介导TNF诱导的人和小鼠细胞坏死性下垂（Sun L等人2012；Zhao J等人2012；Murphy JM等人2013；Chen W等人2013）.涉及在人类组织细胞淋巴瘤U937和腺癌HT-29细胞中敲除内源性MLKL的研究支持MLKL的激活依赖于RIPK3介导的人类MLKL中T357和S358的磷酸化的观点（Petrie EJ et al.2018）.虽然野生型人MLKL可以重建坏死下垂信号，但T357E/S358E磷酸模拟物和T357A/S358A磷酸消融人MLKL构建物都可以在存在坏死下垂刺激的情况下阻断MLKL-/-U937和HT-29细胞系的坏死下垂（Petrie EJ et al.2018）此外，将含有人类MLKL假活性位点突变的结构物（如在结肠、肺、子宫内膜癌和黑色素瘤标本中观察到的结构物）引入MLKL-/-U937细胞不会促进MLKL的杀伤活性，而是延迟了坏死性下垂刺激治疗后的细胞死亡动力学美国（Petrie EJ等人，2018年）。生物物理数据表明，有缺陷的MLKL变体锁定在单体构象中，这阻碍了组装成导致细胞死亡的高阶低聚物（Petrie EJ等人，2018年）.尽管野生型人类MLKL与人类RIPK3激酶结构域紧密结合，但未检测到人类MLKL T357E/S358E构造体的结合（Petrie等人，2018）。这些数据支持人类MLKL激活依赖于细胞中招募人类RIPK3作为其激活前体的想法（Petrie EJ等人，2019）RIPK3介导的人MLKL的磷酸化被认为触发MLKL假激酶内的构象变化，促进N端四螺旋束（4HB）结构域暴露，使MLKL形成更高阶的MLKL组装体，并被运输到质膜（Sun L et al.2012；Wang H et al.2014；Petrie EJ et al.20172018、2019；2020；Samson et al.2020）。MLKL的磷酸化可能导致MLKL从RIPK3分离，然后转移到细胞通透性发生的质膜（Davies KA et al.2020；Murphy JM 2020）值得注意的是，MLKL组装成高阶物种和MLKL寡聚体转移到质膜是坏死性下垂的标志（Davies KA等人，2020年；Petrie EJ等人，2020年；Samson等人，2020年）.该反应性事件表明4个MLKL分子与RIPK1:RIPK3低聚物结合，但MLKL结合的确切化学计量尚不清楚（Chen X等人2014；Cai Z等人2014；Davies KA等人2018；Petrie EJ等人2018；Petrie EJ 2017审查）单细胞成像方法显示，内源性人类MLKL在坏死小体上聚集成更高阶物种，在MLKL化学计量中是异质的（Samson等人，2020）。MLKL下游的坏死下垂调节和执行机制仍不清楚。