ATR- atrip复合物与RPA-ssDNA复合物结合时刺激ATR激酶活性。ATR随后可磷酸化并激活检查点激酶Chk1，从而进一步放大检查点信号。然后，ATR和Chk1激酶修饰各种因素，这些因素可以导致停滞的DNA复制叉的稳定，抑制起源激活，抑制细胞周期进程，动员DNA修复因子，诱导凋亡。这种检查点信号机制在真核生物中高度保守，在S. cerevisiae(分别为Mec1和Ddc2)、S. pombe(分别为rad3和rad26)、X. laevis(分别为Xatr和Xatrip)等生物中均发现ATR和ATRIP的同源物。

ATR (ATM-和rad3相关)激酶是人类细胞中重要的检查点因子。在对复制应激(即导致复制叉停止的应激)或紫外线辐射的反应中，ATR变得活跃并磷酸化许多参与检查点反应的因子，包括检查点激酶Chk1。在人类细胞中，ATR总是与ATRIP (ATR相互作用蛋白)相关。siRNA耗尽ATRIP导致ATR蛋白丢失，但不影响ATR mRNA水平，这表明复杂的形成稳定了ATR蛋白。ATRIP也是ATR激酶的底物，但ATRIP的修饰并不显著调节ATR-ATRIP的募集到损伤部位、Chk1的激活或p53的修饰。

虽然ATR-ATRIP复合物与长度为30或50 nt的ssDNA复合物的结合很差，但在存在75 nt ssDNA分子时结合显著增强。复杂的形成主要是由ATRIP和RPA之间的物理相互作用介导的。ATRIP分子中的多个元素可以与RPA-ssDNA复合物结合，包括残基1-107(最高亲和力)、218-390和390-791(最低亲和力)。虽然全长ATRIP不能结合ssDNA，但当存在于兔网织红细胞裂解物时，内部区域(108-390)可以弱结合ssDNA。ATR可以独立于RPA直接与ssDNA结合，但这种结合被ATRIP抑制。在结合后，ATR激酶被激活，并可以直接磷酸化底物，如Rad17。