有丝分裂检查点或纺锤体组装检查点是一种进化上保守的机制，它确保染色体不对齐的细胞不退出有丝分裂形成非整倍体细胞。由于染色体附着在纺锤体微管上是一个随机过程，并不是所有染色体在纺锤体赤道上同时对齐。因此，即使是单个未对齐的染色体也能阻止后期的发作，这是至关重要的。检查点监测染色体排列状态的能力是通过将检查点蛋白分配到着丝粒上实现的，着丝粒是位于染色体着丝粒上的一个大分子复合物，它与纺锤体微管建立连接。

检查点蛋白以一种未知的方式监测着运动相关蛋白和微管之间的机械活动。在动点的机械活动缺陷激活了常驻的检查点蛋白质开始一个信号，这个信号在整个细胞中被放大，最终阻止了姐妹染色单体分离所需的蛋白水解过程的激活和后期的开始。未对齐染色体的着丝点与对齐染色体的着丝点有两种不同。对齐的染色体的着丝点充满20至30个微管。此外，施加在每个姐妹丝点上的向极地方向的力产生它们之间的张力。另一方面，未对齐的着丝点没有被微管饱和，也没有张力。有丝分裂检查点检测是否存在独立的着丝粒，而不是监测是否存在附着的着丝粒。因此，独立的着丝粒发出抑制信号，抑制启动后期开始所需的生化事件。这种抑制信号在独立的着丝点产生的机制尚未确切确定，但信号是由于缺乏微管占用和着丝点张力而产生的。单个独立的着丝粒能够阻止细胞脱离有丝分裂。 The mitotic checkpoint provides a way for a localized defect to affect the global biochemical status of the cell. In principle, the signal that is generated at an unattached kinetochore diffuses throughout the cell to affect its target. There are currently two models for how this is achieved. One model is based on the observation that the Mad2 checkpoint protein binds and is rapidly released from unattached kinetochores. The kinetochore is believed to act as a catalyst that converts Mad2 into an inhibitory state that diffuses throughout the cell upon its release from the kinetochore. A second model proposes that the signal is amplified by a kinase cascade much like a conventional signal transduction pathway. This kinase cascade is believed to be comprised of the checkpoint kinases, hBUBR1, hBUB1, hMPS1.